大肠杆菌质粒DNA不同提取方法的比较

实验采用简化的碱法少量提取法、简便快速的煮沸法及试剂盒法提取质粒 p CB30 2 -3.并通过一对特异引物对质粒 DNA进行 PCR(聚合酶链式反应 )扩增 ,分别对各种方法所提取的质粒 DNA及其 PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳分析 ,结果表明碱法少量提取法和试剂盒法所提取的质粒 DNA纯度和产量高 ,且重复性好 ,达到了分子生物学实验要求 .其中简化的碱法少量提取法具有结果稳定和经济的特点 ,非常适合大多数实验室使用 .     

人白介素-6表达质粒的构建及在酿酒酵母中的表达

将带有哺乳动物细胞信号肽的人白细胞介素-6(hIL-6)基因片段构建到大肠杆茵-酵母细胞穿梭型质粒pYES2中，获得表达质粒pYES2-hIL-6。另外，将表达质粒pYES2-hIL-6转化到酿酒酵母细胞DBY747中，并将获得的转化子在含2％乳糖的YP培养基中培养到OD600=1．0左右，后用2％的半乳糖进行了诱导表达。结果发现，在培养上清中发现人白介素-6的分泌。     

应用多重PCR法鉴定产志贺样毒素大肠杆菌毒力基因

目的：从各种来源的标本中快速鉴定STEC毒力基因，并了解其在菌株中的分布情况．方法：采用多重PCR的方法鉴定STEC的特征性毒力因子stx1，six2，eaeA和hlyA．结果：各种标本中鉴定出产志贺毒素的大肠杆菌共46株，38株(82．6％)携带stx1基因，30株(65．2％)具有six2基因，22株(47．8％)同时检测到2种基因．36株(78．3％)检测到hlyA基因，24株(52．2％)有eaeA基因．4种毒力基因即six1 stx2 eaeA hlyA的有19株(41．3％)，而且血清型均为O157．结论：产志贺样毒素大肠埃希菌毒力基因图谱是一个重要的分子流行病学标志，应用多重PCR可简便、快速、敏感、特异性地鉴定出STEC的特征性毒力基因，并依照毒力基因存在情况判定其致病性能．     

大肠杆菌—分枝杆菌启动子探针型穿梭载体pEQ3的构建

报道了大肠杆菌－分枝杆菌启动子探针型穿梭质粒ｐＥＱ３的构建过程。证明其保留了在大肠杆菌和分枝杆菌之间的穿梭功能，并具有启动子筛选功能。利用构建的ＰＥＱ３质粒，从卡介苗染色体中筛选出了具启动子活力的ＤＮＡ片段。     

发根农杆菌诱导植物毛状根的发生及次生代谢物生产的研究进展

发根农杆菌(Agmbacterium rhizogenes)中含有Ri质粒．在自然条件下，发根农杆菌通过伤口侵染植物，使植物产生毛状根，本文从发根农杆菌的特性，及其所含有的Ri质粒的结构和功能，发根农杆菌诱导毛状根发生的机理，毛状根的转化方法，培养和鉴定及用于植物次生代谢生产方面的应用研究进行了综述．     

带有绿色荧光蛋白基因(gfp)的植物重组表达质粒pBI-GFP的构建

利用 DNA重组技术 ,将经定点突变改造的绿色荧光蛋白基因 ( gfp)克隆到植物表达载体p BI-1 2 1中 ,成功地构建了植物重组表达质粒 p BI-GFP.     

重组质粒pPIC9K-pZP3α-hCGβ CTP109～145的构建

目的：为发展多特异性避孕疫苗,制备重组抗原pPIC9K－pZP3α－hCGβCTP^109-145,用基因工程技术构建重组质粒pPIC9K－pZP3α－hCGβCTP^109-145,方法：根据pZP3α全长和hCG 0633CTP109-145编码的DNA序列设计两对引物,通过部分重聚合酶链式反应（overlaping PCR）,扩增出pPIC9K－pZP3α－hCGβCTP^109-145片断,克隆到载体质粒pPIC9K中,然后导入大肠杆菌DH5α,用PCR和双酶切反应鉴定重组质粒,并用DNA测序仪对重组质粒测序,结果：3步PCR扩增出pPIC9K－pZP3α－hCGβCTP^109-145DNA片段,插入到载体质粒pPIC9K的克隆位点,获得重组pPIC9K－pZP3α－hCGβCTP^109-145表达质粒,测序结果显示插入序列与设计预期完全一致。结论：重组质粒pPIC9K－pZP3α－hCGβCTP^109-145构建成功,为表达重组抗原pPIC9K－pZP3α－hCGβCTP^109-145,探讨重组多特异性避孕疫苗抗生育效能的研究建立基础。     

质粒pGEX-4T-2在表达宿主菌中的分离稳定性

为了寻找影响质粒pGEX-4T-2在表达宿主菌中分离稳定性有关的因素及水平,将质粒pGEX-4T-2转化到表达宿主菌JM109中.挑取单克隆后培养过夜,10%量接种培养,5h后将菌液稀释106倍后等量的分别涂布到LB和LA固体培养基中,37℃培养过夜后数其菌落数,二者相比得到分离稳定率.数据分析采用F-检验,多重比较采用LSR法及Q法.经统计学处理,抗生素的浓度,培养温度以及它们的交互作用对质粒pGEX-4T-2在表达宿主JM109中的分离稳定性均有显著性的影响,并且随着抗生素的浓度的提高质粒pGEX-4T-2在表达宿主JM109中的分离稳定性有提高的趋势.     

CdCl2对质粒DNA的作用

镉是一种致癌物质，其致癌作用与Cd^2 有着直接或间接的作用．用一定浓度的CdCl2液处理质粒pUC119和pCPP9，通过琼脂糖凝胶电泳分析，研究了镉对质粒DNA结构的影响．结果表明，CdCl2溶液2．5μg／mL作用12h或20μg／mL作用1h后，能导致质粒pCPP9的DNA损伤；浓度40μg／mL以上的CdCl2作用12h后，引起质粒pUC119的DNA损伤；且随着CdCl2浓度增大和作用时间的延长，对质粒DNA的损伤作用增强．     

偶氮染料脱色优势菌的特性及基因定位初步研究

对分离到的两株偶氮染料脱色优势菌的特性和控制脱色的基因定位进行了研究,结果表明,两株脱色优势菌均为兼性厌氧菌,生长受ｐＨ值影响较大,适应温度范围较广;它们均能有效脱除偶氮染料的色度;它们都含有质粒,其携有控制偶氮还原酶产生的基因;通过质粒转化得到的转化子较之其野生菌有更好的脱色效果．